用普通光(guāng)學顯微鏡觀察時，難(nán)以辨清這樣物(wù)體的(dí)結構(gòu)，必(bì)須(xū)借助於(yú)相差顯微鏡，使(shǐ)用固定和染色等(děng)理(lǐ)化方(fāng)法(fǎ)，使(shǐ)樣品(pǐn)和(hé)背景(jǐng)的透射光(guāng)在(zài)波(bō)長或(huò)振(zhèn)幅(fú)上發生(shēng)變化(huà)，即在顏色(sè)和亮(liàng)度上有所差(chà)異，以供識(shí)別。
生物(wù)學(xué)研究經(jīng)常要(yào)觀(guān)察又薄(báo)又透明(míng)的樣品(pǐn)，往(wǎng)往使用某種特定染料對(duì)細胞(bāo)染色(sè)才(cái)可以觀察(chá)到(dào)，而(ér)使用(yòng)相差顯微鏡則不需要對樣(yàng)品進(jìn)行處理就可以直接(jiē)對細(xì)胞進行(háng)觀(guān)察(chá)。相差(chà)顯微(wēi)鏡(jìng)能(néng)觀(guān)察到(dào)透(tòu)明(míng)樣品的(dí)細(xì)節(jié)，適用於(yú)對活(huó)體細胞生活狀(zhuàng)態下的(dí)生(shēng)長(cháng)，運動，增(zēng)殖(zhí)情(qíng)況(kuàng)及細微(wēi)結構的觀察(chá)。相差顯(xiǎn)微鏡(jìng)是(shì)微生物學，細胞生(shēng)物(wù)學，細胞和(hé)組(zǔ)織培養(yǎng)，細胞(bāo)工程，雜(zá)交瘤(liú)技(jì)術等現(xiàn)代生(shēng)物學(xué)研(yán)究的必(bì)*工(gōng)具(jù)。
使用(yòng)相(xiāng)差(chà)顯微鏡注(zhù)意事(shì)項：
1，光(guāng)源(yuán)要(yào)強，相(xiāng)差(chà)顯(xiǎn)微鏡(jìng)聚光(guāng)鏡中的環狀光闌遮掉大部(bù)分光(guāng)源，所以(yǐ)應將視場光(guāng)闌和孔徑光闌(lán)*開(kāi)啟(qǐ)。
2，采用(yòng)單(dān)色光(guāng)，為(wéi)了獲(huò)得良(liáng)好效(xiào)果，相(xiāng)差顯(xiǎn)微鏡應(yīng)使(shǐ)用波長範(fàn)圍窄(zhǎi)的近(jìn)於單色(sè)的(dí)光(guāng)源(yuán)，相(xiāng)位(wèi)的(dí)變化常因照明(míng)光綫(xiàn)的波長而(ér)不同(tóng)。通常(cháng)采用(yòng)綠色濾(lǜ)光(guāng)片來調整(zhěng)光源(yuán)波長，*好按廠(chǎng)家(jiā)專(zhuān)用相襯鏡檢的(dí)綠色(sè)濾光片(piàn)進(jìn)行鏡檢(jiǎn)。
3，切片要薄(báo)，以(yǐ)5~10μm左(zuǒ)右(yòu)為(wéi)宜，或者更薄，如(rú)果樣品過(guò)厚(hòu)，樣品(pǐn)的(dí)上(shàng)層(céng)是很清楚的(dí)，深(shēn)層(céng)則會模(mó)糊不(bù)清並(bìng)且會產(chǎn)生相位移(yí)幹擾及(jí)光(guāng)的散射(shè)幹擾，影(yǐng)響(xiǎng)相差顯微鏡(jìng)成象質量(liáng)。
4，載玻長，蓋玻片(piàn)的厚(hòu)度應符(fú)合標準，且不(bù)應有(yǒu)疵痕，製片的(dí)封(fēng)固劑應(yīng)均匀一(yī)致(zhì)。如(rú)果(guǒ)有(yǒu)劃痕，厚薄不均(jūn)或(huò)凹(āo)凸不平，則會(huì)產生亮(liàng)環歪斜及相位(wèi)幹(gān)擾。玻(bō)片過(guò)厚(hòu)或過(guò)薄會使環狀(zhuàng)光(guāng)闌(lán)亮環變大或(huò)變(biàn)小(xiǎo)。相差(chà)顯(xiǎn)微鏡(jìng)觀察時要蓋上蓋(gài)玻片(piàn)，否則(zé)環(huán)狀(zhuàng)光(guāng)闌(lán)的亮(liàng)環和相板的暗(àn)環很(hěn)難(nán)重合。
5，物鏡與(yǔ)聚光鏡匹(pǐ)配：注意相(xiāng)差物鏡(jìng)和聚光鏡裏的(dí)相(xiāng)差環(huán)要調成對(duì)應的。簡(jiǎn)單(dān)的方法就是物鏡(jìng)上(shàng)的(dí)Ph標示與聚(jù)光鏡(jìng)上(shàng)的(dí)標示(shì)相同(tóng)，換物(wù)鏡時一定要記得(dé)把聚光鏡轉(zhuǎn)到(dào)對應的位置。
6，相位倒轉(zhuǎn)，相差顯(xiǎn)微鏡(jìng)得(dé)到(dào)象的明暗(àn)反差正好相反。當相(xiāng)位差δ=0時(shí)是(shì)無法識別(bié)的，隨(suí)著(zhuó)δ的增大(dà)反(fǎn)差(chà)變大，當(dāng)δ繼(jì)續(xù)增大到某一(yī)值(zhí)後(hòu)會(huì)出(chū)現(xiàn)相位(wèi)倒(dǎo)轉。用(yòng)90%高吸(xī)光值(zhí)(高(gāo)反(fǎn)差)物(wù)鏡(jìng)時，這個(gè)轉變值約(yuē)為(wéi)0.55λ，用70%標準(zhǔn)吸光(guāng)值(zhí)的物鏡時(shí)約為0.33λ。較(jiào)高吸光值的(dí)物(wù)鏡(jìng)應(yīng)該用於(yú)分辨較小(xiǎo)的光程(chéng)差。
7，暈(yùn)輪和漸暗效(xiào)應(yīng)
暈輪(lún)：由(yóu)於相位的延遲而變(biàn)暗時，並不是(shì)光的損失，而是光在(zài)象平麵上(shàng)重(zhòng)新分配的結果(guǒ)，因此在黑暗區(qū)域明顯消失(shī)的光(guāng)會在較暗(àn)物(wù)體的(dí)周(zhōu)圍(wéi)出現一(yī)個(gè)明(míng)亮的(dí)暈(yùn)輪，當環(huán)狀(zhuàng)光闌很窄時(shí)暈(yùn)輪現(xiàn)象更為嚴(yán)重(zhòng)。
漸暗(àn)效(xiào)應：相(xiāng)差觀察(chá)相位(wèi)延遲相(xiāng)同的(dí)較(jiào)大區域時(shí)，該(gāi)區域邊(biān)緣(yuán)會出現(xiàn)反(fǎn)差下降(jiàng)。
使用相(xiāng)差(chà)顯微鏡(jìng)效(xiào)果圖：